Seplife G50 M層析介質(zhì)是一種具有三維網(wǎng)狀結構的高分子化合物，它是由葡聚糖加入交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷通過醚鍵互相交聯(lián)聚合而成，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔結構就越緊密，吸水后的體積膨脹就越小，能允許進入層析介質(zhì)內(nèi)部的分子的分子量也就越小，反之亦然。層析時，大于層析介質(zhì)孔徑的大分子，被阻于凝膠相外，沿著層析介質(zhì)顆粒之間的間隙走，下移速度最快，故最先洗脫下來，中等大小的分子進入部分層析介質(zhì)孔中，洗脫速度次之，而小分子因為能夠進入全部層析介質(zhì)孔中，受到阻力最大，故最后被洗脫下來，由此，物質(zhì)得到分離和純化。Seplife G50葡聚糖層析介質(zhì)適用于脫鹽、多肽分離、清洗生物提取液、分子量測定。

使用方法

3.1預處理

稱取所需Seplife G50 M，置于50~100倍蒸餾水中溶脹，室溫條件下一般需要溶脹1~2天，沸水中一般需要2小時，讓凝膠充分溶脹直至體積不再變化。

注：在溶脹前加入蒸餾水使其自然沉降，自然沉降后若上層溶液中漂浮的凝膠碎片顆粒多，需要重復多次漂洗將其除去，防止層析時阻塞凝膠柱，影響流速。

3.2 裝柱

裝柱按照標準操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.3平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務必使流出液的電導和pH同上樣緩沖液的電導和pH完全一致。

3.4上樣

（1）介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的，分子量大的先流出來。

（2）凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50 cm 以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可。

（3）樣品中如有雜質(zhì)或沉淀應該在上樣前過濾或離心除去，樣品的粘度不能過高，否則影響分離效果。

3.5洗脫

可以采用無鹽水，也可以采用用平衡緩沖液做洗脫劑進行洗脫。在平衡緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或者鹽梯度洗脫都可以完全分離。

3.6在位清洗

凝膠使用10次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗4個柱床體積，再以至少3個柱床體積平衡緩沖液再生。

3.7存儲

干粉保存在4~30℃，干燥、通風、清潔處；溶脹后的介質(zhì)保存在4~8℃，20%乙醇溶液中，避免與氧化劑接觸，不可冷凍。

3.8運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

4.注意事項

（1）樣品必須澄清沒有顆粒。

（2）樣品與層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進行柱層析。 

（3）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應重裝。

（4）洗脫過程中應嚴格控制流速，且勿過快。

（5）加樣及整個洗脫過程中，嚴防柱面變干。

（6）本品應避免與氧化劑接觸，避免長時間暴露在空氣中。

生產(chǎn)日期：見標簽

使用期限：在適當?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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