Seplife ? Pd oneS填料與質粒 DNA能特異性的結合，通過洗雜將 RNA、內毒素和 HCP等物質去除，此外可有效分離開環(huán)質粒和超螺旋質粒，提高超螺旋質粒的濃度。質粒 DNA 經過Seplife ? Pd oneS填料純化后，用異丙醇沉淀法進行沉淀，最后再使用 70%乙醇洗滌和沉淀，能夠獲得高質量質粒 DNA，可直接用于酶切、PCR、測序、轉化等分子生物學實驗。Seplife ? Pd oneS填料不僅可以實現一步純化質粒 DNA，同時還能夠有效去除內毒素與其他雜質，操作簡便，可有效提高實驗效率。

2.1 產品參數

2.2 重力柱產品介紹

Seplife?Pd oneS 重力柱可以快速獲得質粒 DNA 用于分子克隆，基因測序，細胞轉染和其他生物學實驗。它能夠在短時間內得到高純度的質粒 DNA (pDNA)，并且可以有效地分離開環(huán)質粒和超超螺旋質粒。通過使用無熱原水和控制條件，可以有效地去除內毒素和其他雜質，使用內毒素去除試劑可以得到細胞轉染級質粒。此外，Seplife?Pd oneS重力柱可以原位清洗和重復使用，具有良好的使用效率。

Seplife?Pd oneS重力柱可用于制備 0.5 mg至 10 mg質粒 DNA的各種尺寸。PGRapid Pd oneS S、M、L和 XL的最大質粒結合能力分別至少為 0.5 mg、1 mg、5 mg和 10 mg。

2.3 實施示例 

使用 Seplife ? Pd oneS填料純化不同質粒效果如下圖所示。（注：P為質粒 Plasmid簡寫）

                               圖 1. Seplife ? Pd oneS純化不同質粒 

使用大規(guī)格的重力柱可快速得純化到 10~20mg質粒 DNA，純化效果良好證明 Seplife ? PdoneS填料具有良好的放大效應，純化效果如下圖所示：

                               圖 2. 50mL填料的 Seplife ? Pd oneS重力柱純化質粒

常規(guī)使用方法

3.1 裝柱

按照重力柱的裝填流程操作。依此將下篩板，填料，上篩板裝入重力柱管中。注意：請將填料搖勻后使用勻漿液裝填，避免使用硬器攪拌。

3.2 平衡

使用 2~5倍柱床體積（BV）的平衡緩沖液平衡柱子，使流出液的電導和 pH同上樣緩沖液的電導和 pH一致。

3.3 上樣

（1）樣品前處理：使用堿裂解法制備樣品，渾濁的樣品離心和過濾后上樣。建議使用 50mM Tris-HCl，10mM EDTA，pH 7.5的重懸液以 5:1（為提高質粒收率可以選擇 10:1）重懸菌泥（體積質量比），然后加入 0.2M NaOH，1% SDS處理 4-10min，注意加入堿后要緩慢攪拌。堿裂解的過程要注意堿的加入方式及接觸時間，避免質粒發(fā)生不可逆損傷而影響質粒 DNA 的回收率。最后使用 3M 醋酸鉀 pH5.5 中和裂解液，靜置 30min 后，將裂解液離心取上清或者使用膜過濾澄清后上樣。

（2）上樣：樣品一般現制現用，不建議使用久置樣品，影響純化效果。上樣結束后使用 1BV的平衡緩沖液進行淋洗或者直接進行洗雜。

3.4 洗雜

使用洗雜緩沖液去除 RNA、內毒素和 HCP等物質，為了盡量提高樣品純度，建議使用 3~5 BV清洗或更高。

3.5 洗脫

（1）使用洗脫緩沖液進行洗脫，建議用 1~2 BV的洗脫緩沖液洗滌，確保質粒 DNA的洗脫效率。

（2）樣品后處理：在洗脫液中加入終濃度大于 30%的異丙醇進行沉淀，4℃靜置 30min后，≥10000g 離心 20min，然后去上清（禁止晃動，減小損失），迅速加入 1/4洗脫體積的 70%或無水乙醇洗滌質粒 DNA樣品，4℃靜置 30min后，≥10000g離心 30min，最后溫和的移去上清（禁止晃動，避免固體顆粒移除），待離心管乙醇完全揮發(fā)后使用超純水或核酸保存 Buffer 進行復溶，保存?zhèn)溆谩?/span>

3.6 原位清洗（CIP）

質粒純化結束后，首先用超純水清洗重力柱 3BV，然后使用 0.5M NaOH溶液對重力柱進行原位清洗，使用 2 BV的氫氧化鈉溶液浸泡 15~30min，或者使用 5BV的氫氧化鈉溶液動態(tài)清洗，最后使用超純水將重力柱替換至中性。

3.7 存儲

密封保存在 4~30℃（保存溶液為 20%乙醇）干燥、通風、清潔處，不可冷凍；用過的重力

柱置于 4~30℃，用 20%乙醇溶液保存。

3.8 運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

4. 轉染級質粒制備使用流程（控制內毒素）

4.1 裝柱

在無菌環(huán)境下，按照重力柱的裝填流程操作。依此將下篩板，填料，上篩板裝入重力柱管中。建議將填料搖勻后使用勻漿液裝填，避免使用硬器攪拌。

4.2 平衡

使用 2~5倍柱床體積（BV）的平衡緩沖液平衡柱子，使流出液的電導和 pH同上樣緩沖液的電導和 pH完全一致。

4.3 上樣

（1）樣品前處理：使用堿裂解法制備樣品，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。建議 5:1 重懸菌泥（體積質量比），然后加入 0.2M NaOH，1% SDS處理 4-10min，注意加入堿后要緩慢攪拌。堿裂解的過程要注意堿的加入方式及接觸時間，避免質粒發(fā)生不可逆損傷而影響質粒 DNA的回收率。第三步使用 3M 醋酸鉀 pH5.5 中和裂解液，靜置 30min 后，將裂解液離心取上清或者使用膜過濾澄清。最后，在澄清的樣品中加入 10%（v/v）內毒素去除試劑，4℃靜置 30min后備用。

（2）上樣：需要嚴格控制重力柱中內毒素污染，請?zhí)崆笆褂?0.5M NaOH 溶液清洗，并使用無熱原水將柱子平衡至中性，此外樣品必須現制現用。在潔凈環(huán)境中進行上樣，上樣結束后可直接進行洗雜。

4.4 洗雜

使用洗雜緩沖液去除 RNA、內毒素和 HCP 等物質，為了提高洗雜效率，建議使用 3~5BV清洗或更高。

4.5 洗脫

（1）使用洗脫緩沖液進行洗脫，建議用 1~2BV的洗脫緩沖液洗滌，確保質粒 DNA的洗脫效率。

（2）樣品后處理：在洗脫液中加入終濃度大于 30%的異丙醇進行沉淀，4℃靜置 30min后，≥10000g 離心 20min，然后去上清（禁止晃動，減小損失），迅速加入 1/4洗脫體積的 70%或無水乙醇洗滌質粒 DNA樣品，4℃靜置 30min后，≥10000g離心 30min，最后溫和的移去上清（禁止晃動，避免固體顆粒移除），待離心管乙醇完全揮發(fā)后使用無熱原水或核酸保存 Buffer進行復溶，保存?zhèn)溆谩?/span>

4.6 原位清洗（CIP）

質粒純化結束后，首先用無熱原水清洗重力柱 3BV，然后使用 0.5M NaOH溶液對重力柱進行原位清洗，使用 2BV 的氫氧化鈉溶液浸泡15~30min，或者使用 5BV 的氫氧化鈉溶液動態(tài)清洗。最后使用無熱原水將重力柱替換至中性。

4.7 存儲

密封保存在 4~30℃（保存溶液為 20%乙醇）的無菌環(huán)境中，不可冷凍；用過的重力柱置于在 4~30℃的無菌環(huán)境中，用無熱原水配置的 20%乙醇溶液保存。

4.8 運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

5. 注意事項

（1）所有緩沖液使用前請進行滅菌或無菌過濾，避免污染。

（2）裝填后的重力柱使用過程中請嚴格按照清洗流程清洗后保存，否則會影響后續(xù)使用效果和使用壽命。

（3）建議根據不同需求選擇合適大小的重力柱管，裝柱前禁止將填料脫水處理，禁止使用硬器攪拌，建議搖勻后裝填柱。

（4）樣品濃度不宜過高，重力條件下高濃度容易造成樣品損失。

（5）如若對內毒素有嚴格要求，請使用無熱原水配置所有 Buffer，所有設備進行無菌處理后在潔凈間進行實驗，且操作流程使用說明書中轉染級質粒制備使用流程。

訂貨信息 

下表是重力柱貨號：

生產日期：見標簽

使用期限：4-30℃，20%乙醇密封保存，保存期 2年

注冊人名稱/生產企業(yè)：西安藍曉科技新材料股份有限公司

注冊人住址/生產地址：西安市高新開發(fā)區(qū)錦業(yè)路 135號藍曉科技園

售后服務單位：西安藍曉科技新材料股份有限公司

郵政編碼：710076

聯系電話：86-29-8110 4050

傳真：029-8669 1600-8254

官方網站：www.sunresin.com

注冊人名稱/銷售企業(yè)：蘇州藍曉生物科技有限公司

注冊人地址/銷售地址：蘇州市區(qū)工業(yè)園區(qū)裕新路 108號 5樓 525室

聯系電話：0512-65160522