上海層析介質(zhì)聯(lián)系電話地址
發(fā)布時(shí)間：2023-04-02 01:53:27
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溶菌緩沖液和純化工藝的前期步驟中常常會(huì)添加蛋白酶抑制劑以防止目標(biāo)蛋白質(zhì)被內(nèi)源性蛋白酶酶解。而純化工藝的后期一般不用再添加這些蛋白酶抑制劑，因?yàn)榇藭r(shí)幾乎所有的蛋白酶都已經(jīng)從目標(biāo)蛋白質(zhì)分離出去。蛋白質(zhì)的保存緩沖液中通常要添加金屬螯合劑，如EDTA或EGTA。這些金屬螯合劑與 Mg2+結(jié)合以防止目標(biāo)蛋白質(zhì)被所含的金屬蛋白酶分解。還有一些其他的添加劑，主要是用來(lái)保護(hù)蛋白質(zhì)不被破壞和增強(qiáng)其溶解性。
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親和層析介質(zhì)的特點(diǎn)：1、基于配體和分離物間的特異性親和作用，分離選擇性強(qiáng)，效果好，純化倍數(shù)高。2、能完成一步方法很難完成的分離，如變性和非變性的，功能不同的蛋白。3、通常一步純化就可達(dá)到>90%的純度。4、速度快，操作簡(jiǎn)單。
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Plasmid Seplife LX，絲氨酸蛋白酶純化親和層析介質(zhì)：苯甲脒類物質(zhì)是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑，將這類物質(zhì)偶聯(lián)到高流速瓊脂糖凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)上，可以從各種來(lái)源的樣品中進(jìn)一步胰蛋白酶，凝血酶，尿激酶，激肽釋放酶，前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。
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硼酸親和層析介質(zhì)：硼酸能和1，2順式二醇結(jié)合，所以硼酸瓊脂糖介質(zhì)可以用于糖類，核苷，核酸，肽及酶類的分離純化，特別適合糖蛋白的分離純化。本產(chǎn)品將硼酸類化合物偶聯(lián)到活化的瓊脂糖凝膠4FF上，用于上述物質(zhì)的分離純化。
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在蛋白純化開(kāi)始之前要對(duì)其進(jìn)行穩(wěn)定性研究，溫度，pH，離子強(qiáng)度，添加劑及濃度的穩(wěn)定性研究一定要在純化蛋白之前就進(jìn)行有效可靠的驗(yàn)證。對(duì)溫度敏感型蛋白的純化制備盡可能在4度的環(huán)境中進(jìn)行。同時(shí)對(duì)耐高溫的蛋白如糖化酶，可以利用此特性來(lái)在高溫下讓其它雜蛋白變性沉淀，目標(biāo)蛋白活性無(wú)影響這一特性來(lái)純化蛋白。蛋白存在體系避免劇烈變化，在包涵體復(fù)性的過(guò)程有深刻體系，梯度逐漸減少變性劑可提高復(fù)性率。所以我們?cè)诩兓鞍讜r(shí)就要避免體系的劇烈變化。親和層析純化蛋白時(shí)，大多需要較低的pH洗脫，在收集洗脫峰的容器中墊緩沖液（常用1M的Tris)，讓洗脫下來(lái)的蛋白迅速恢復(fù)到中性環(huán)境。避免純化過(guò)程中蛋白發(fā)生沉淀。
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金屬螯合親和層析介質(zhì)：組氨酸（His）的殘基上帶有一個(gè)咪唑基團(tuán)，可以和Ni2+,Co2+等過(guò)渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結(jié)合在金屬離子上，這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質(zhì)上，因此帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白在經(jīng)過(guò)裝配了金屬離子的層析介質(zhì)時(shí)可以選擇性的結(jié)合在介質(zhì)上，而其他的雜質(zhì)蛋白則不能結(jié)合或者僅能微弱結(jié)合。結(jié)合在介質(zhì)上的HIS標(biāo)簽蛋白可以通過(guò)提高緩沖液中的咪唑濃度進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性洗脫，從而得到較高純度的HIS標(biāo)簽蛋白。